中国医科大学附属第二医院妇产科一氧化氮
与盆腔沙眼衣原体感染的关系

一、资料与方法
　　1.研究对象：1997年8月至1998年1月在我院妇科就诊不孕两年以上、经盆腔检查及输卵管碘油造影检查证实为输卵管堵塞的患者，21例；输卵管结扎术后行再通术者9例。平均年龄(30.0±3.8)岁，均无恶性肿瘤、糖尿病、高血压、自身免疫病、其他感染性疾病，无近期服用硝酸盐类药物史。根据Ruijs等^［3］所制定的标准，即术中检查存在输卵管、卵巢周围粘连、输卵管积水，及因此引起输卵管梗阻者，诊断为盆腔炎。
　　2.方法：(1)输卵管组织标本采集：对输卵管性不孕患者在行腹腔镜下粘连分离或造口术时切取3 mm输卵管组织；对拟行输卵管再通术患者在开腹手术中，于结扎瘢痕处切取相同大小的输卵管组织。将组织块切成两段，一段置盛生理盐水的无菌试管中，-20℃冰箱保存，另一段置10%中性甲醛液中固定。(2)血清标本采集：手术前一日上午9时取肘正中静脉血2 ml，4℃、3 000 r/min离心15分钟，取上清液分装于两个试管内，置-20℃冰箱保存。(3)盆腔液采集：手术进入腹腔后立即抽取盆腔液4 ml，处理方法与血清相同，分装于两个试管内，置-20℃冰箱保存。(4)输卵管组织CT-DNA检测：使用套式聚合酶链反应(PCR)技术检测，试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供，于405 bp处出现荧光光带者为CT-DNA阳性。(5)血清及盆腔液中NO检测：使用酶法检测NO，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。此方法利用硝酸还原酶特异地将NO₃^-还原为NO₂^-，通过检测NO₂^-的浓度间接反应NO的水平。用分光光度计于550 nm、0.5 cm光处，检测反应样品的吸光度值，计算NO水平。(6)血清及盆腔液中IFN-γ的检测：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定，试剂盒由华美生化有限公司提供。(7)组织病理学检查：将固定好的组织块石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察。
　　3.统计学方法：采用t检验和χ²检验，相关性分析采用直线回归分析检验。

二、结果
　　1.30例患者输卵管组织CT-DNA检测结果：输卵管性不孕患者中13例CT-DNA阳性，阳性率62%；输卵管结扎术后患者CT-DNA阳性4例(4/9)，两者比较，差异无显著性(P>0.05)。
　　2.输卵管组织CT-DNA阳性与阴性患者的血清及盆腔液中NO测定结果：以输卵管组织CT-DNA阳性与否分别观察，CT-DNA阳性者血清NO水平明显高于CT-DNA阴性者；两者的盆腔液NO水平无明显差异。见表1。

　　4.盆腔炎患者与非盆腔炎患者盆腔液中NO水平比较：输卵管性不孕、CT-DNA阳性患者中9例(69%)有盆腔炎。盆腔炎患者CT-DNA阳性者盆腔液NO水平明显高于非盆腔炎患者CT-DNA阳性者，见表3。

表3　输卵管组织CT-DNA阴性与阳性
伴或不伴盆腔炎患者盆腔液中
NO水平比较(μmol/L, ±s)

三、讨论
　　1.输卵管性不孕与CT引起的盆腔炎直接相关：本资料中输卵管性不孕者CT-DNA阳性检出率62%，且有9/13例(69%)显示有盆腔炎改变，其发生率与国内外报道相一致^［1］。
　　2.NO与盆腔CT感染相关：CT-DNA阳性者血清NO水平明显高于CT-DNA阴性者，血清及盆腔液中NO与IFN-γ水平间呈正相关。提示，盆腔CT感染可引起血中NO水平升高，且NO的生成可能受IFN-γ调节。关于细胞介导的免疫机理国外学者已在体外模型和动物实验中证实^［2］，在人体尚缺乏证据。本资料中13例输卵管组织CT-DNA阳性者病理检查显示有95%为淋巴细胞及浆细胞浸润，巨噬细胞却极少见。说明，NO可能做为细胞内的效应分子杀伤细胞内寄生的CT，造成感染组织的损伤。
　　盆腔液NO水平在CT-DNA阳性与阴性者间无显著差异，而盆腔炎者CT-DNA阳性明显高于非盆腔炎者；同时，CT-DNA阳性、CT-DNA阴性患者的盆腔液和血清NO水平无明显相关。其原因，可能是盆腔液的NO除一小部分由血液渗透外，大部分来源局部的免疫反应，即当CT感染局限于输卵管内未引起炎症时，盆腔液的NO水平不升高。本资料中盆腔炎者，无论CT-DNA阳性或阴性，其盆腔液中NO水平均升高，可解释NO升高并非CT感染的特异表现^［4］，也可能见于其他病原体引起的慢性炎症。