中华妇产科杂志990114

	中华妇产科杂志 CHINESE JOURNAL OF OBSTETRICS AND GYNECOLOGY 1999年第1期 No.1 1999

子宫内膜异位症患者血中自然杀伤细胞
及腹腔液中肿瘤坏死因子的测定

韩璐　常德安

　　近年来,子宫内膜异位症(内异症)发病率明显增高, 以往的各种学说对病因均不能作完善解释。大量研究表明，免疫学变化在该病的发病机理中具有重要作用。我们通过对29 例内异症患者外周血自然杀伤细胞(NKC)活性及腹腔液中肿瘤坏死因子(TNF)进行测定,了解两者在内异症中的变化。
　　一、资料和方法
　　1.研究对象:为1995年3月至1997年3月大连市妇产医院、大连医科大学附属第二医院收治的子宫内膜异位症患者，29例(内异症组),年龄25～50岁。按美国生育协会修正标准分期：Ⅰ期4例,Ⅱ期6例,Ⅲ期9例,Ⅳ期10例,均经开腹手术后病理检查证实,且术前3个月内未经激素治疗。同时选择月经周期规律、生育力正常的育龄期妇女15例为对照(对照组),年龄31～45岁,其中11例为行输卵管绝育术,4例为行输卵管再通术者。
　　2.方法:NKC活性测定:均于月经周期的第5天采外周血3 ml, 2 ml置肝素抗凝管,测NKC活性用,余1 ml的血清标本-20℃保存待测雌二醇(E₂)用。制备靶细胞:由大连医科大学卫生学教研室提供传代培养24小时后的K562细胞,调整细胞浓度为2.5×10⁵个/ml,成活率达95%以上。制备效应细胞:抗凝的静脉血2 ml, 分离淋巴细胞,调细胞浓度为5×10⁶个/ml,成活率达95%以上。以2小时短程释放法测活性。测定组效靶各0.1 ml, 自然释放组以培养液代替效应细胞;最大释放组以表面活性剂代替效应细胞。在酶联免疫测定仪中以490 nm测其吸光度值(A),每份标本均做复管。外周血E₂测定:采用放射免疫(放免)法,由天津九鼎公司提供E₂放免测定试剂盒,于标准曲线上查出标本E₂浓度。腹腔液TNF含量测定:开腹手术者立即收集腹腔液5 ml置于无菌离心管中,离心后收集上清液置于-30℃保存待测,凡有溶血者弃之不用。采用放免法测定,由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供TNF放免分析盒,按说明书操作,于自动γ计数器上测定,按放免程序直接得出样品中的TNF浓度。
　　3.统计学方法:结果以±s表示,显著性标准α=0.05( 双侧)。两样本间行t检验,多样本间行方差分析、直线回归与相关分析。
　　二、结果
　　1.外周血NKC活性:内异症组外周血NKC活性为14.9%±12.4%，较对照组的37.7%±4.2%为低,差异有极显著性(P<0.01)。
　　2.NKC活性与疾病程度的关系:NKC活性与临床期别呈负相关(r=-0.83,P<0.001)，随临床期别增加而递减。见表1。
　　3.血NKC活性与血E₂水平的相关性:两者呈负相关(r=-0.88， P<0.001)。见表1。

表1　两组NKC活性、TNF含量及E₂水平(±s)

组别	总例数	NKC(%)	TNF(μg/L)	E₂(pmol/L)
对照组	15	37.7±4.2	0.55±0.40	148±　39
内异症组
Ⅰ期	4	24.0±7.2	0.62±0.22	112±　26
Ⅱ期	6	20.7±7.2	0.78±0.52	161±　48
Ⅲ期	9	13.5±8.0	1.11±0.71	411±165
Ⅳ期	10	9.2±3.4	1.46±1.02	653±226

　　4.腹腔液TNF含量:内异症组腹腔液中TNF含量为(1.09±0.96) μg/L，较对照组(0.55±0.40) μg/L增高, 差异有显著性(P<0.05)。内异症组Ⅰ、Ⅱ期TNF含量与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)；Ⅲ、Ⅳ期与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ期患者TNF含量［(1.29±0.93) μg/L］较Ⅰ、 Ⅱ期［(0.71±0.44) μg/L］增加,差异有显著性(P<0.05)。
　　三、讨论
　　NKC作为一类无须致敏而具有细胞毒性的淋巴细胞，在机体的抗肿瘤发生中发挥着重要的免疫监督作用。本研究结果显示，内异症患者外周血NKC活性显著降低,这与Oosterlynek等^［1］报道的一致。体外实验也表明，NKC与子宫内膜细胞杀伤有关, 推测内异症患者血NKC活性下降致使异位腹腔内的活性内膜细胞未被消除^［2］。本研究结果还显示,内异症患者NKC活性与临床期别呈负相关,即随着疾病程度的进展NKC活性下降更为明显。人们发现，内异症是雌激素依赖性疾病,而雌激素又是免疫功能的重要调节因素。本研究发现，内异症患者存在着高雌激素水平和低 NKC 活性的现象。NKC活性与外周血E₂浓度呈负相关,Ⅲ、Ⅳ期患者较Ⅰ、 Ⅱ期E₂水平升高明显,其原因可能是E₂对NKC毒性有直接抑制作用^［3］。大量研究表明,内异症的免疫变化与细胞因子有着密切的关系,其中TNF参与内异症的发病和进展。而内异症患者腹腔液TNF含量明显增高，且随病变程度加重而增加。TNF在刺激T淋巴细胞增殖,活化介导免疫反应,促进前列腺素合成和纤维蛋白形成,盆腔纤维化和粘连形成中起一定作用。内异症患者为什么会出现低NKC活性、高TNF含量这一矛盾现象，两者何为因果，有待进一步探讨。

作者单位：116012 大连市妇产医院(韩璐)；大连医科大学附属第二医院妇产科(常德安)

参考文献

　[1]　Oosterlynek DJ,Cornillic FJ, Wear M, et al. Women with endometriosis show a defect in natural killer activty resulting in a decreased cytotoxicity to autologous endometrium.Fertil Steril， 1991，56:45-51.
　[2]　Hirata J, Kikuchi Y, Imaizumi E, et al. Endometriotic tissue produce immunosuppressive factors.Gynecol Obstet Invest， 1994，37:43-47.
　[3]　Provinciali M,Fabris N. Models and mechanisms of neuroendocrine- immune interacting during ontogeny. Adv Neuro Immumel, 1991，1:124-138.

(收稿：1997-07-24　　修回：1998-09-10)

(本文编辑：姜民慧)