沙眼衣原体感染输卵管性不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的测定

李海燕　梁占光

　　【摘要】　目的　探讨沙眼衣原体（CT）感染所致输卵管性不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的水平及其意义。方法　用酶联免疫吸附试验法测定22例CT感染输卵管性不孕（A组）、23例非CT感染输卵管性不孕（B组）及19例已生育输卵管正常妇女（对照组）输卵管液中TNF- α和IL-6 的水平。结果　A 组TNF-α的水平为178 ng/L，高于对照组的124 ng/L（P<0.01）；A组中输卵管阻塞者TNF-α为199 ng/L，高于粘连者的142 ng/L（P<0.01）。A 组IL-6的水平为681 ng/L，高于B组的264 ng/L及对照组的229 ng/L（P均<0.01），B组与对照组之间比较差异无显著性（P>0.05）。结论　无症状输卵管CT感染可使输卵管液中TNF-α和IL-6升高，其中TNF-α与输卵管损伤程度有关。TNF-α越高，损伤越重。
　　【关键词】　衣原体，沙眼； 输卵管疾病； 不育，女(雌)性;肿瘤坏死因子; 白细胞介素6

Determination of Tumor Necrosis Factor-alpha and Interleukin-6 Levels of the Tubal Fluids in Patients with Infertility Caused by Infection of Chlamydia Trachomatis

LI Haiyan, LIANG Zhanguang.
（Department of Obstetrics and Gynecology，Dali Medical College，Dali 671000, Yunnan Province, China）

　　【Abstract】　Objective　To study the levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) in tubal fluids of tubal factor infertile (TFI) women due to chlamydia trachomatis (CT) infection and its implication. Methods　Twenty-two TFI women with CT infection (group A), twenty-three TFI　women without CT infection (group B) and nineteen fertile women with normal tubes (group control) were enrolled for study. Levels of TNF-α and IL-6 in tubal fluids were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results　Group A had significantly higher TNF-α levels than those of group control (178 ng/L versus 124 ng/L, P<0.01). Moreover, women with tubal blocks had significantly higher TNF-α than those of tubal adhesions (199 ng/L versus 142 ng/L, P<0.01). IL-6 levels of group A were significantly higher than those of group B and group control (681 ng/L versus 264 ng/L and 229 ng/L, both P<0.01),but there is no difference between group B and group control. Conclusions　Local TNF-α and IL-6 levels increased in silent tubal infection of CT. TNF-α had a positive relevance with the degree of tubal damage.
　　【Key words】　Chlamydia trachomatis;  Fallopian tube diseases; Infertility, female; Tumor necrosis factor; Interleukin-6

　　沙眼衣原体（chlamydia trachomatis，CT）与输卵管性不孕（tubal factor infertility，TFI）关系密切。本研究检测输卵管液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6） 的水平，探讨CT感染TFI的发病机理。

资料与方法

　　一、研究对象
　　为1998年10月至12月在我科因TFI作输卵管粘连分离手术的45例患者及19例（对照组，输卵管外观正常）因绝育后复通或妇科良性肿瘤行卵巢囊肿剥出及子宫切除手术者。全部病例均于术中取输卵管液进行CT-DNA聚合酶链反应（ PCR）检测，CT-DNA阳性的22例TFI为A组，阴性的23例TFI为B组，对照组CT-DNA均为阴性。
　　A组及B组平均27岁，不孕时间3年，原发性不孕A组占41%(9/22)，B组占52%(12/23)。对照组平均年龄34岁，包括绝育术后复通、子宫肌瘤、卵巢囊肿及功能失调性子宫出血等患者。
　　二、研究方法
　　1.标本收集及处理： 采用国产定量滤纸（2.5 mm×0.6 mm）取输卵管液^［1］，吸液量为（23.2±0.3） μl。此滤纸片血清蛋白回收率为99.2%～101.8%^［2］。术中将3张滤纸条分别置入输卵管腔中，浸透输卵管液后放入离心管，加入800 μl生理盐水。所有标本均在-20℃保存，集中测定。
　　2.CT-DNA、TNF-α、IL-6的检测：CT-DNA采用PCR法，试剂盒由伊利康生物技术有限公司提供，引物扩增产生400 bp片段产物。采用酶联免疫吸附法检测TNF-α及IL-6，试剂盒购于深圳晶美生物工程公司。方法是各取稀释浓度的标准品23.23 μl加入800 μl生理盐水中,按前述方法处理后作滤纸片标准品,其余按试剂盒要求操作，拟合标准曲线相关系数分别为0.99及0.95。
　　三、统计学方法
　　TNF-α比较采用单因素方差分析,IL-6用秩和检验，组间比较用q检验。

结果

　　一、 输卵管液中CT-DNA 的检测结果
　　TFI患者的CT-DNA阳性率（49%）明显高于对照组（14%），差异有极显著性（P<0.01）。其中输卵管梗阻者26例的CT-DNA阳性率（54%）与19例粘连者（42%）比较，差异无显著性（P>0.05）。
　　二、输卵管液中TNF-α和IL-6的检测结果
　　A组及B组中TNF-α水平明显高于对照组，差异有显著性（P<0.01，<0.05），但A 组与B组间差异无显著性（P>0.05）。A 组IL-6水平明显高于B组及对照组,差异有极显著性（P均<0.01），但B组与对照组比较，差异无显著性（P>0.05）。 见表1。

讨论

　　一、输卵管液中TNF-α的产生及其作用
　　CT感染时输卵管上皮细胞首先释放TNF-α，再激活局部单核、巨噬细胞产生更多的TNF-α^［3］。Toth等^［1］发现，TNF-α与CT感染输卵管炎损伤有关。本研究也提示TNF-α水平升高与输卵管损伤有关，且水平越高损伤越重。
　　二、输卵管液中IL-6的产生及其作用
　　CT感染时IL-6水平升高。但IL-6在CT感染中所起的作用仍未明确且有争议。本研究提示，IL-6水平在CT感染时明显升高，与CT的亚临床感染或持续性感染状态密切相关。但非CT感染TFI与对照组之间IL-6水平差异无显著性，而该组包括有输卵管损伤的患者，说明IL-6与输卵管损伤无直接联系^［4］。此点有待进一步研究。
　　三、CT感染 TFI局部病变与TNF-α、IL-6的关系
　　本研究表明，TNF-α的产生与输卵管损伤程度有关，而IL-6与TNF-α的趋势相反。有研究表明，IL-6主要参与机体防御反应，与疾病早期有关，TNF-α在高水平时表现为损害效应，与疾病的持续状态有关^［5］。IL-6以剂量依赖方式抑制TNF-α产生^［6］。所以，在输卵管损伤较轻时IL-6水平较高，TNF-α水平较低。随着病程延长，输卵管损伤加重，引起阻塞，IL-6产生相对减少，从而解除了对TNF-α的抑制作用，TNF-α产生增多，输卵管损伤加重。

(本文编辑：姜民慧)

作者单位：李海燕(现在云南省大理医学院妇产科)
梁占光（610041 成都，华西医科大学附属第二医院妇产科）

参考文献

　1，Toth M, Jeremias J, Ledger WJ, et al. In vivo tumor necrosis factor production in women with salpingitis. Surg Gynecol Obstet, 1992, 174: 359-362.
　2，苏琼，张莉，王文达. 纸片血清标本检测乙型肝炎病毒标志物及丙型肝炎抗体的应用. 临床肝胆病杂志，1998,11:228-229.
　3，Ault KA, Tawfik OW, Smith -King MM, et al. Tumor necrosis factor-alpha response to infection with Chlamydia trachomatis in human fallopian tube organ culture. Am J Obstet Gynecol, 1996, 175:1242-1245.
　4，Buyalos RP, Funari VA,Azziz R, et al. Elevated interleukin-6 levels in peritoneal fluid of patients with pelvic pathology. Fertil Steril,1992,58:302-306.
　5，Heremans H, van Damme J, Dillen C, et al. Interferon gamma, a mediator of lethal lipopolysaccharide-induced shwartzman-like shock reactions in mice. J Exp Med, 1990, 171: 1853-1869.
　6，Aderka D, Le JM, Vilcek J. IL-6 inhibits lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor production in cultured human monocytes, U937 cells, and in mice. J Immunol, 1989,143: 3517-3523.