子宫内膜异位症患者T辅助细胞亚群
功能失衡的研究

殷红梅　 王苏荣　 戴淑真 　王秋波

　　【摘要】　目的　探讨T辅助细胞(Th)失衡与子宫内膜异位症(内异症)的关系。 方法　对30例内异症患者（内异症组）及15例健康生育年龄妇女（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）加入植物血凝素进行体外培养诱生。采用酶联免疫吸附试验测定血浆及PBMC培养上清液中Th1类因子干扰素γ（IFN-γ）、Th2类因子白细胞介素4（IL-4）的水平。结果　（1）在PBMC诱生培养上清液中，内异症组IL-4的诱生水平［（32.8±12.5）ng/L］比对照组［(24.3±3.5)ng/L］明显升高（P<0.01）,而IFN-γ的诱生水平内异症组［（1 095.6±375.6） ng/L］较对照组［（1 549.3±361.9）ng/L］下降,内异症组的IFN-γ/IL-4比值(37.7±17.5)下降,与对照组(71.1±12.1)比较，差异均有极显著性（P<0.01）。（2）在血浆中，除内异症组IL-4水平［(32.0±22.6)ng/L］高于与对照组［(23.3±4.3)ng/L］（P<0.05）外，IFN-γ的诱生水平及IFN-γ/IL-4比值与对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）。结论　内异症患者体内存在Th1/Th2失衡，使子宫内膜能够逃避免疫监视及杀伤而在异位种植，引起内异症的发生发展。
　　【关键词】　子宫内膜异位症；T淋巴细胞亚群；干扰素Ⅱ型；白细胞介素4

Study on Interferon γ and Interleukin-4 Contents of Plasma and Cultured Monoclear Cell Supernatants in Patients with Endometriosis

YIN Hongmei, WANG Surong, DAI Shuzhen,et al.
（Department of Obstetrics and Gynecology, Central Hospital of Shengli Oil Company,Dongying 257034,　Shandong Province, China）

　　【Abstract】　Objective　To investigate the cytokin production of T helper cell (Th)1,Th2 subsets in patients with endometriosis（EM）. Methods　The cytokine production of Th1,Th2 cells expressed by interferon-γ (IFN-γ) and interleukin-4 (IL-4) contents respectively in supernatants of cultured PHA induced peripheral blood mononuclear cell (PBMC) and plasma, obtained from 30 EM patients and 15 normal controls were determined by enzyme linked immunoabsorbent assay (ELISA). Results　IL-4 contents of EM patients were elevated both in plasma and PBMC supernatants［(32.0±22.6) ng/L and (32.8±12.5) ng/L, respectively］, while IFN-γ levels was suppressed in PBMC supernatant as compared with normal controls ［(1 095.6±375.6) ng/L and (1 549.3±361.9) ng/L, respectively］ (P<0.01,P<0.05).As a results, the ratio of IFN-γ/IL-4 decreased in EM patients. Conclusions　Changes of IFN-γ and IL-4 contents in EM patients may reflect functional inbalance between Th1 and Th2 cells, which may play a role in the pathogenesis of EM.
　　【Key words】Endometriosis; T-lymphocyte sursets; Interferon type Ⅱ; Interleukin-4

　　 T辅助细胞(T helper cell,Th)根据其产生细胞因子的不同分为Th1和Th2两大亚群。正常状态下Th1、Th2处于动态平衡，一旦失衡则引起疾病。目前对子宫内膜异位症（内异症）患者Th亚群变化的研究结果尚不一致^［1，2］。本研究对外周血单个核细胞(PBMC)加植物血凝素诱生培养，用酶联免疫吸附试验测定血浆及培养上清液中Th1类细胞因子干扰素（IFN）-γ、Th2类细胞因子白细胞介素4（IL-4）水平，研究内异症患者有无Th1、Th2失衡现象。

资料与方法

　　一、研究对象
　　1．内异症组：为1998年3月至1999年3月在我科住院经腹腔镜手术及临床确诊的30例内异症患者。3个月内未用激素类药物。按美国生育协会分期标准，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为5、8、7、10例。年龄21～45岁，平均年龄（33.2±4.0）岁（±s，下同）。
　　2.对照组：为同期选择的15 例盆腔结构正常妇女，包括行输卵管结扎及吻合术者。均无自身免疫与过敏性疾病、急性炎症，未用激素类药物。平均年龄(32.5±5.0) 岁。
　　二、方法
　　1.PBMC培养诱生上清液的制备：于治疗前取静脉血4 ml，1%依地酸二钠抗凝后取1 ml血浆-70℃冰箱保存待测。淋巴细胞分离液分离PBMC，用Hank′s液洗涤沉积细胞，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基，调整细胞浓度至2×10⁶个/ml，吸取1 ml PBMC悬液至培养板，加入植物血凝素-P 50 μg/ml，5%二氧化碳培养箱37℃培养72 h，取上清液放入-70℃冰箱待测。
　　2．细胞因子的检测：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定IL-4、INF-γ，试剂盒为美国Genzyme公司生产。
　　三、统计学方法
　　结果用±s表示，采用t检验进行分析。

结果

　　一、PBMC诱生培养上清液中IL-4、IFN-γ的水平及IFN-γ/IL-4比值变化
　　内异症组，IL-4诱生水平比对照组明显升高，二者差异有极显著性(P<0.01)；IFN-γ诱生水平较对照组下降（P<0.01）；IFN-γ/IL-4比值较对照组下降（P<0.01）。见表1。
　　二、血浆中IL-4、IFN-γ及IFN-γ/IL-4比值变化
　　除了内异症组IL-4水平升高（P<0.05）外，IFN-γ的水平及IFN-γ/IL-4比值与对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）。见表1。

讨论

　　一、 Th1/Th2失衡在内异症中的意义
　　IL-2、IFN-γ是Th1分泌的主要因子，IL-4是Th2分泌的因子，可以抑制Th1细胞分泌系列因子^［3］。与Th1/Th2平衡有关的细胞因子主要是IFN-γ和IL-4等。IFN-γ和IL-4通常相互排斥，有时Th1或Th2即只指产生IFN-γ或IL-4的细胞^［4］。因此本研究测定IL-4、IFN-γ来探讨内异症患者体内Th的状态。
　　本研究显示，IL-4在血浆及PBMC培养上清液中水平升高，而IFN-γ在内异症组PBMC诱生水平显著下降。PBMC培养上清中IFN-γ/IL-4比值变化，提示了Th1/Th2的失衡状态。机体在对抗自身及外来抗原入侵的过程中以Th1介导的细胞免疫为主，一旦由Th1向Th2偏移，则机体处于免疫抑制状态。本研究中，内异症患者表现的这种向Th2偏移的状况造成细胞免疫抑制，从而使异位内膜象肿瘤细胞或病原体一样逃避免疫监视，造成异位内膜广泛种植。
　　二、IL-4水平升高对内异症的意义
　　内异症患者外周血淋巴细胞介导针对子宫内膜的毒性下降^［5］。IL-4可通过抑制IL-2介导IL-2受体的产生而对IL-2依赖性T细胞及自然杀伤细胞的活性抑制，结果抑制了淋巴杀伤性细胞的活性^［6］。本实验说明，在内异位症中巨噬细胞、T杀伤细胞、自然杀伤细胞活性降低可能是由于IL-4及IFN-γ的比例失调引起。

(本文编辑：姜民慧)

作者单位：王苏荣（266003　青岛大学医学院附属医院妇科）
戴淑真（266003　青岛大学医学院附属医院妇科）
殷红梅（胜利油田中心医院妇产科）
殷红梅（266003　青岛大学医学院附属医院妇科）
王秋波（青岛大学医学院免疫教研室）

参考文献

　1，Juha P, Teisala K, Ranta H,et al. Increased levels of interleukin-6 and interleukin-10 in the peritoneal fluid of patients with endometriosis. Am J Obstet Gynecol, 1996,174:1522-1526.
　2，Hsu CC, Yang BC, Wu MH,et al. Enhanced interleukin-4 expression in patients with endometriosis. Fertil Steril, 1997,67:1059-1064.
　3，Tanaka T, Huli J, Seder RA, et al. Interleukin 4 suppresses interleukin 2 and interferon gamma production by native T cells stimulated by accessory cell-dependent receptor engagement. Proc Natl Acad Sci USA, 1993,90:5914-5918.
　4，Elson LH, Nutman TB, Metcalfe DD, et al. Flow cytometric analysis for cytokine production identifies T helper 1,T helper 2, and T helper 0 cell within the human CD4+ CD27- lymphocyte subpopulation. J Immunol, 1995,154:4294-4301.
　5，Oosterlynck DJ, Cornillie FJ, Wear M, et al. Women with endometriosis show a defect in natural killer activity resulting in a decreased cytotoxicity to autologous endometrium. Fertil Steril, 1991,56:45-51.
　6，Maggi E, Parronchi P, Manetti R, et al. Reciprocal regulatory effects of IFN-gamma and IL-4 on the in vitro development of human Th1 and Th2 clones. J Immunol, 1992,148:2142-2147.