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多药耐药(Multidrug resistance,MDR)是指肿瘤细胞对一类结构和功能并不同的化疗药物产生的交叉耐受,是导致临床化疗失败的重要原因。以往对MDR的研究多集中于P 糖蛋白(P-gp)的过度表达,然而耐药的产生是多因素和复杂的,近几年来的资料表明,Topo-Ⅱ基因表达的变化也是MDR产生的因素之一。本研究通过ElivisionTM plus方法检测正常子宫内膜、增生性子宫内膜、子宫内膜癌组织P-gp、Topo-Ⅱ表达情况，探讨P-gp和Topo-Ⅱ在子宫内膜癌多药耐药中的可能作用。
1.材料与和方法
1.1标本来源 本研究中的10例正常子宫内膜，12例子宫内膜增生症，42子宫内膜癌例均取自西安交通大学第一附属医院病理科1991年12月1日-2004年12月10日存档蜡块。42例子宫内膜癌标本中中腺癌35例，其他癌（腺磷癌，磷癌，腺棘癌）7例；伴有淋巴结侵润者2例，无淋巴结侵润者40例；肌层侵润深度≥1/2者14例，肌层侵润深度＜1/2 28例。按1988年FIGO标准行临床分期：I期9例，II期24例，III期9例。按WHO组织分化标准:高分化(G1) 16例，中分化(G2) 17例，低分化(G3) 9例。所有子宫内膜癌病人术前均未经过化疗或放疗，所有标本均经两位病理科医师认定。
1.2 染色方法 石蜡包埋，石蜡切片厚5μm,HE染色,确定诊断。兔抗人P-gp单克隆抗体抗（ 购自福州迈新公司）兔抗人Bcl-2单克隆抗体（购自美国Newmark公司）。石蜡切片经脱蜡和微波加热处理后,依次进行免疫组化染色:1∶10(体积比)正常血清封闭,加抗P-gp、Bcl-2单克隆抗体（工作液），滴加1∶400(体积比)生物素标记的IgG和1∶400(体积比)链酶抗生物素蛋白过氧化物酶复合物,最后用DAB显色,苏木素复染,酒精脱水,二甲苯透明,封片。每批均设阴性对照,实验条件严格一致。
1.3 结果判断 P-gp的阳性表达为细胞浆或细胞膜呈棕黄色颗粒，Topo-Ⅱ的阳性表达均为细胞核呈棕黄色颗粒。光镜下观片，双盲法记数阳性细胞。随机选5个高倍镜视野(×400)，记数300个肿瘤细胞，根据着色细胞的数目判定染色结
果。参考Kawamato的标准，棕黄色细胞数≤30%者为阴性标本，棕黄色细胞数>31%判定为阳性。
1.4 统计学处理 实验采用x2检验、确切概率法及Spearman相关分析。P<0.05表示数据间具有显著性差异，P>0.05表明数据间无显著性差异。所有统计学检验结果均经SPSS 10.0软件处理。
2 结果
P-gp阳性颗粒主要位于腺细胞的胞膜，小部分位于内质网和高尔基体; Topo-Ⅱ阳性颗粒主要定位于细胞核，核呈深棕黄色颗粒状。阳性细胞分布无规律，呈灶状或单个细胞散在分布。间质细胞呈阴性反应。
图1 子宫内膜癌中P-gp的阳性表达×400 图2 子宫内膜癌中Topo-Ⅱ的阳性表达×400
Fig1 Expression of P-gp in endometrial Fig2 Expression of Topo-Ⅱ in endometrial carcinoma carcinoma
2.1 P-gp、Topo-Ⅱ在正常子宫内膜、增生性子宫内膜和子宫内膜癌中的表达
P-gp在三种组织中的表达呈上升趋势，但无显著性差异(P ＞0.05)。Topo-Ⅱ在正常子宫内膜、增生性子宫内膜和子宫内膜癌中的表达有差异，在正常子宫内膜和增生性子宫内膜中Topo-Ⅱ的表达有显著性差异(P＜0.05），在增生性子宫内膜子和子宫内膜癌中的表达也有显著性差异 (P＜0.05），而正常子宫内膜与子宫内膜癌比较无显著性差异(P ＞0.05)。
表1 P-gp、Topo-Ⅱ在正常子宫内膜、增生性子宫内膜和子宫内膜癌中的表达
Tab1 Expressionsof P-gp and Topo-Ⅱindifferenttis sues
|
组织类型 |
P-gp蛋白表达 |
χ2值 |
Topo-Ⅱ蛋白表 |
χ2值 |
|
阳性 |
阳性率% |
阳性 |
阳性率% |
|
正常内膜 |
1 |
10.00 |
1.691 |
4 |
40.00 |
2.764 |
|
增生性内膜 |
4 |
33.33 |
0.541 |
9 |
75.00 |
10.725b |
|
子宫内膜癌 |
19 |
45.24 |
4.237 |
10 |
23.81 |
1.076 |
aP (正常子宫内膜vs增生性内膜)＜0.05 bP (增生性内膜vs子宫内膜癌)＜0.05
2.3子宫内膜癌中P-gp 、Topo-Ⅱ的表达与病理参数的关系
子宫内膜癌中P-gp、 Topo-Ⅱ的表达均与临床分期无关、肌层浸润、有无淋巴转移均无关。但均与子宫内膜癌分化程度有关，低分化子宫内膜癌中P-gp、 Topo-Ⅱ阳性表达率均明显高于高分化子宫内膜癌，两组之间有显著性差异 (P<0.05)。而中分化子宫内膜癌与高分化子宫内膜癌阳性表达率无显著性差异。
表2 P-gp 、Topo-Ⅱ的表达与临床病理参数之间的关系
Tab2 Relationship between clinical and pathological characters of endometrial carcinoma
|
|
例数 |
P-gp表达阳性 |
|
Topo-Ⅱ表达阳性 |
|
|
阳性(%) |
χ2 |
P |
|
阳性(%) |
χ2 |
P |
|
FIGO分期 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
9 |
4(44.45) |
0.138 |
1.000a |
|
1(11.11) |
0.416 |
1.000a |
|
|
24 |
9(37.50) |
2.241 |
0.239b |
|
5(20.83) |
1.840 |
0.212b |
|
Ⅲ |
9 |
6(66.67) |
0.900 |
0.639c |
|
4(44.44) |
2.492 |
0.294c |
|
病理分级 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
G1a |
16 |
5(31.25) |
0.061 |
1.000d |
|
2(12.50) |
0.004 |
1.000d |
|
G2a |
17 |
6(35.29) |
6.801 |
0.014e |
|
2(11.76) |
8.327 |
0.008e |
|
G3a |
9 |
8(88.89) |
7.667 |
0.011f |
|
6(66.67) |
7.767 |
0.010f |
|
组织类型 |
|
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|
|
|
|
|
|
|
|
35 |
16(45.71) |
|
|
|
8(22.86) |
|
|
|
其他 |
7 |
3(42.86) |
0.019 |
1.000 |
|
2(28.57) |
0.105 |
1.000 |
|
肌层侵润 |
|
|
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|
|
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