原因不明性难免流产患者蜕膜大颗粒淋巴细胞的变化

　　有研究表明，原因不明性习惯性流产与免疫有关^［1］。本研究以原因不明性难免流产患者为研究对象，通过检测其蜕膜中大颗粒淋巴细胞(LGL)数量及亚群变化，探讨原因不明性流产的局部免疫因素。
　　一、资料与方法
　　1.研究对象： 原因不明性难免流产组(难免流产组)：15例，均为本院门诊病例，孕周8～14周，病史与B超检查示胚胎停止发育，包括胚囊比孕周小或未见胚芽或未见胎儿原始心血管搏动。正常妊娠组：正常妊娠要求行人工流产者16例，孕周6～12周，无急、慢性疾病史，同时B超检查显示胚胎发育正常。
　　2.方法：(1)流产病例筛查方法：根据我院常规，依据病史、B超检查、性激素测定［雌二醇(E₂)、孕酮(P)、催乳素(PRL)］、自身抗体检测［可提取的核抗原抗体(ENA)、抗核抗体(ANA)、抗心磷脂抗体(ACL)］及流产胚胎刮出物滋养叶细胞染色体核型分析，以排除遗传、解剖、内分泌及自身免疫异常。(2)蜕膜淋巴细胞分离法：取新鲜蜕膜组织4～17 g，磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次，机械剪切、过滤，淋巴细胞分离液分离(2 000 r/min 20分钟)，取中间层淋巴细胞，1640培养液洗涤3次，稀释为1～5×10⁶ /ml细胞悬液，行淋巴细胞计数及用胎盼蓝染色法测定细胞存活率。(3)LGL测定：取0.1 ml细胞悬液，加入20 μl异硫氰酸荧光素(FITC)-CD₁₆及20 μl藻红蛋白(PE)-CD₅₆，置4℃冰箱内40分钟，PBS洗涤2次，甲醛固定，用流式细胞仪行双荧光检测。
　　二、结果
　　1.蜕膜淋巴细胞分离情况：每克淋巴组织可获得0.75×10⁵～1.8×10⁵个淋巴细胞， 所得细胞存活率大于95%。
　　2.LGL总量测定：难免流产患者蜕膜淋巴细胞中的CD₅₆⁺ LGL含量与正常妊娠组比，差异无显著性(P>0.05)，见附表。
　　3.LGL亚群测定： 难免流产患者蜕膜淋巴细胞中，CD₅₆⁺CD₁₆⁺ LGL含量与正常妊娠者相比，明显增多(P<0.01)，而CD₅₆⁺CD₁₆^- LGL的含量明显降低(P<0.05)。
　　三、讨论
　　从免疫学观点看，妊娠是一种半同种移植，妊娠是否成功与子宫局部免疫状态有关。蜕膜是最直接与胚胎接触的母体组织，围着床期和早孕时，蜕膜部位出现大量免疫细胞，包括巨噬细胞、LGL和T淋巴细胞等，目前特别引人注意的是LGL，因为它是自然杀伤细胞，在免疫防护中可以不经致敏而对外来抗原直接进行免疫反应。LGL根据表型可分为两型，一为CD₅₆⁺CD₁₆^-，胞浆内颗粒大，体积小，对胚胎等起免疫防护作用；二为CD₅₆⁺CD₁₆⁺，体积大，胞浆颗粒多，具有免疫排异杀伤功能^［2］。
　　本研究结果显示，在早孕子宫蜕膜中，存在大量LGL，多数为CD₅₆⁺CD₁₆^-，难免流产与正常妊娠相比，CD₅₆⁺细胞总数即LGL总数不变，但蜕膜内CD₅₆⁺CD₁₆⁺LGL明显增多，CD₅₆⁺CD₁₆^-LGL明显减少。King等^［3］在体外实验中证明，CD₅₆⁺CD₁₆^-LGL在白细胞介素-2(IL-2)诱导下可转化为CD₅₆⁺CD₁₆⁺LGL，且细胞毒作用明显增强。Ho等^［4］也发现，无胚胎妊娠中，蜕膜自然杀伤细胞的杀伤活性明显增强，这提示原因不明性难免流产与免疫反应特别是蜕膜CD₅₆⁺CD₁₆⁺ LGL增加有关。Clark等^［5］的研究也支持本研究的观点，他对胎盘床进行活检发现，体积小的LGL(CD₅₆⁺CD₁₆^-LGL)消失的患者，妊娠将失败，这种患者的蜕膜内体积大的LGL(CD₅₆⁺CD₁₆⁺LGL)增多。
　　综上所述，蜕膜LGL可能在妊娠中起重要作用，其亚群比例失调将导致流产等病理妊娠。