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错配修复基因hMSH2蛋白在人卵巢恶性肿瘤
组织中的表达及其临床意义
马琳 张军航 彭芝兰 曹泽毅
【摘要】 目的 检测hMSH2基因在人卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其与卵巢恶性肿瘤临床病理特征的关系。方法 应用免疫组织化学链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测42例卵巢恶性肿瘤组织中错配修复基因hMSH2蛋白的表达。结果 26例卵巢恶性肿瘤组织有hMSH2蛋白表达（62%），多发生于浆液性腺癌和粘液性腺癌（80%和80%），而在子宫内膜样癌和恶性生殖细胞肿瘤中表达较少（1/6和1/6，P<0.05），其中中～高分化癌hMSH2蛋白的表达率为83%，高于低分化癌（46%）（P<0.05）。无淋巴结转移者hMSH2蛋白的表达率（72%），高于有淋巴结转移者（31%，P<0.05）。hMSH2蛋白的表达与卵巢恶性肿瘤的临床分期无明显相关性。结论 hMSH2基因参与了卵巢恶性肿瘤的发生、发展及分化过程，并与预后有密切的关系。hMSH2蛋白的检测有助于卵巢恶性肿瘤的早期诊断及判断预后。
【关键词】 卵巢肿瘤；原癌基因蛋白；基因表达；原癌基因
Expression of Mismatch Repair Gene hMSH2 in Human Malignant Ovarian Tumors and its Clinical Significance
MA Lin
（Department of Obstetrics and Gynecology, Second Affiliated Hospital, China Medical University, Shenyang 110003, China）
ZHANG Junhang，PENG Zhilan，et al.
【Abstract】 Objectives To study the expression of hMSH2 gene in human malignant ovarian tumor and its relationship to clinicopathological characteristics. Methods The expression of hMSH2 gene in 42 patients with malignant ovarian tumor was detected by immunohistochemistry streptomycin peroxidel method using monoclonal antibody to hMSH2 protein. Results hMSH2 expression was observed in the 26 of 42 malignant ovarian tumors (62%), more frequently present in serous and mucinous adenocarcinoma (80%, 80%)than in endometrioid adenocarcinoma and malignant germinal tumors (1/6, 1/6)(P<0.05). It was significantly higher in high grade than in low grade (P<0.05),and the reduced expression of hMSH2 was also significantly more often in lymph-nodes metastasized cases. Statistical analysis indicated that hMSH2 expression wasn′t related to the stage of the tumors. Conclusions These results suggest that the abnormal expression of hMSH2 might be involved in the carcinogenesis process and progression of malignant tumor, and that the loss of the hMSH2 protein expression might be a useful predictor of early diagnosis and prognosis of malignant ovarian tumor.
【Key words】 Ovarian neoplasms;Proto-oneogene proteins;Gene expression; Proto-oncogenes
最新的研究结果表明，在与肿瘤发生有关的基因中，除癌基因、抑癌基因和凋亡基因、抗凋亡基因外，还存在着另一类基因，即错配修复(mismath repair)基因［1,2］。对错配修复基因的发现和研究，是近年来分子生物学研究领域的一项重大进展。本研究应用免疫组织化学技术，检测错配修复基因hMSH2蛋白在卵巢恶性肿瘤组织中的表达，并探讨其与卵巢恶性肿瘤临床病理特征之间的关系。
资料和方法
一、研究对象
42例标本来自1996年1月～1998年4月华西医科大学及辽宁省肿瘤医院。标本经10%的甲醛固定，石蜡包埋，连续切片。其中浆液性腺癌20例，粘液性腺癌10例，子宫内膜样癌6例，恶性生殖细胞肿瘤6例；除6例恶性生殖细胞肿瘤外，中～高分化癌23例，低分化癌13例；临床I～II期14例，III～IV 期28例；16例发生淋巴结转移，18例未发生淋巴结转移(另8例手术未获得淋巴结标本)。所有患者术前均未经过放射治疗或化学治疗。
二、主要试剂及方法
hMSH2单克隆抗体购自美国Pharmergin公司，链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）试剂盒为美国ZYMED公司产品。采用免疫组织化学SP法进行染色 。组织切片厚5 μm，抗体稀释至1∶20，每次染色均设阴性及阳性对照。染色结果的判定：切片中阳性细胞数<20%为阴性；阳性细胞数>20%为阳性，即有hMSH2蛋白表达。
三、 统计学分析
本研究采用χ2检验或四格表确切概率法。
结果
一、不同组织学类型卵巢恶性肿瘤hMSH2蛋白的表达
42例卵巢恶性肿瘤组织中26例有hMSH2蛋白表达（62%），其中卵巢浆液性腺癌和粘液性腺癌中hMSH2蛋白的表达率分别为80%（16/20）和80%（8/10），均高于子宫内膜样癌（1/6）和恶性生殖细胞肿瘤（1/6），差异有显著性（P<0.05）。见表1。
表1 卵巢恶性肿瘤患者临床病理特征与
hMSH2蛋白表达的关系
| 类别 |
总
例数 |
hMSH2表达 |
P值 |
| 例数 |
百分率(%) |
| 组织学类型 |
| 卵巢浆液性腺癌 |
20 |
16 |
80 |
| 卵巢粘液性腺癌 |
10 |
8 |
80 |
| 子宫内膜样癌 |
6 |
1 |
1/6* |
<0.05 |
| 恶性生殖细胞肿瘤 |
6 |
1 |
1/6* |
<0.05 |
| 临床分期 |
| Ⅰ～Ⅱ期 |
14 |
10 |
71 |
| Ⅲ～Ⅳ期 |
28 |
16 |
57 |
>0.05 |
| 分化程度 |
| 中～高分化 |
23 |
19 |
83 |
| 低分化 |
13 |
6 |
46 |
<0.05 |
| 淋巴结转移 |
| 有 |
16 |
5 |
31 |
| 无 |
18 |
13 |
72 |
<0.05 |
| * 例数少于10例，不计算百分率
二、不同临床分期卵巢恶性肿瘤hMSH2蛋白的表达
I～II期14例中，10例有hMSH2蛋白表达（71%），III～IV期28例，16例有hMSH2蛋白表达（57%），两者比较，差异无显著性（P>0.05）。见表1。
三、 不同分化程度卵巢恶性肿瘤hMSH2蛋白的表达
中～高分化癌23例患者，hMSH2蛋白表达19例（83%）；低分化癌13例，hMSH2蛋白表达（46%）6例，两者比较，差异有显著性（P<0.05）。见表1。
四、 有无淋巴结转移卵巢恶性肿瘤hMSH2蛋白的表达
发生淋巴结转移者的16例中，5例有hMSH2蛋白表达（31%），未发生淋巴结转移者18例中，13例有hMSH2蛋白表达（72%），两者比较，差异有显著性（P<0.05）。见表1。
讨论
一、错配修复基因的结构及生物学作用
正常情况下，DNA的双螺旋结构是靠A-T，G-C之间的氢键互补配对而维持的，当各种因素使DNA之间的碱基互补配对发生了错误，即形成了DNA的错配。为保证DNA复制的忠实性，维持基因组的稳定性，降低细胞的自发突变，需要对错配的碱基进行修复，即错配修复。发挥这种作用的基因即错配修复基因［3］。当错配修复基因由于突变而不能发挥错配修复功能时，将会出现微卫星的不稳定性。到目前为止，已发现至少有5种错配修复基因与人类肿瘤的发生有关［4-7］。其中hMSH2基因是在人类遗传性非息肉形成性结直肠癌中分离出的第1个错配修复基因［6］，与细菌的mutS基因同源，大约有50%～60%的遗传性非息肉形成性结直肠癌是由hMSH2基因突变引起的。hMSH2基因定位于2p21-22号染色体上，基因组全长约73kb（不包括启动子），含16个外显子，编码909个氨基酸的蛋白质。hMSH2基因的突变将产生缺陷的蛋白，从而不能发挥错配修复功能，导致微卫星DNA的不稳定性，增加整个基因组的不稳定性，从而引起包括癌基因和抑癌基因等一系列改变，当突变积累到一定程度，就会导致细胞的恶性转化，发生多种肿瘤。因而有人认为，hMSH2等错配修复基因的改变，可能是多步骤致癌的一个始动因子［8］。
二、hMSH2基因与卵巢恶性肿瘤临床病理特征的关系
Jin 等［9］报道了115例膀胱癌移行上皮细胞中，hMSH2蛋白的表达率为75%，并且随着细胞分化程度的降低而升高。Kim等［10］应用Western blot方法，发现6例微卫星不稳定性的结肠癌病例中，5例hMSH2蛋白表达降低。因此作者推测，hMSH2等错配修复基因蛋白的表达与微卫星的不稳定性关系密切，并且检测蛋白的表达可用于疾病的诊断。本研究发现，hMSH2蛋白在不同类型的卵巢恶性肿瘤中的表达不同，在卵巢浆液性腺癌和粘液性腺癌中的表达率明显高于子宫内膜样癌和恶性生殖细胞肿瘤。这一结果表明，hMSH2基因可能在子宫内膜样癌和恶性生殖细胞肿瘤的发生过程中起较为重要的作用，卵巢特殊类型的肿瘤与常见类型的肿瘤（浆液性腺癌和粘液性腺癌），可能有不同的分子生物学发生机理。这与国外的报道基本相符［11,12］。本研究还发现，hMSH2蛋白的表达与临床分期无关，而与肿瘤的病理分级和淋巴结转移有关，在低分化癌和有淋巴结转移的病例中hMSH2蛋白的表达明显降低。说明hMSH2基因的改变可能发生在肿瘤发生的早期，并参与了肿瘤的分化过程及淋巴结转移过程。有hMSH2基因改变的病例，一般分化程度较差，多有淋巴结的转移，因而患者的预后较差。因此，错配修复基因蛋白的检测，可能有利于卵巢恶性肿瘤的早期诊断及预后评价，尤其是特殊类型的卵巢肿瘤。
(本文编辑：赵小丽)
马琳（中国医科大学附属第二医院妇产科）
张军航（辽宁省肿瘤医院外科）
彭芝兰（610041 成都，华西医科大学第二附属医院妇产科）
曹泽毅（610041 成都，华西医科大学第二附属医院妇产科）
参考文献
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9，Jin TX, Furihata M, Yamasaki I, et al. Human mismatch repair gene (hMSH2) product expression in relation to recurrence of transitional cell carcionma of the urinary bladder.Cancer, 1998, 85:478-484.
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(收稿日期：1999-10-04) | |
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