周从容　陈贵安　薛爱玲

　　细胞凋亡不仅存在于正常的子宫内膜，也存在于增殖症和癌变的子宫内膜中^［1，2］。研究发现，抑凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax对调节子宫内膜凋亡，维持正常月经周期起着重要作用^［3，4］。本研究旨在探讨正常和异常子宫内膜，Bcl-2家族中Bcl-X基因的分布特点以及与凋亡的关系。
　　一、材料与方法
　　1.组织标本：子宫内膜组织标本55例，系1997年11月至1999年6月北京医科大学第三临床医学院妇产科于手术中收集，其中增殖期20例（早期6例、中期6例、晚期8例）和分泌期27例（早期8例、中晚期19例）子宫内膜标本，取自因子宫肌瘤、子宫内膜异位症行子宫切除术的患者；另外月经期8例子宫内膜取自因不孕症于月经第1天行诊断性刮宫术的患者。患者年龄25～45岁，月经周期规律，术前3个月内无性激素用药史。月经周期的判断是依据周期的时间、血清雌二醇、孕酮水平以及组织切片确定。增殖症子宫内膜18例（简单增生9例、复杂增生4例、不典型增生5例）及癌变子宫内膜13例（高分化5例、中分化6例、低分化2例）均取自因阴道异常出血行诊断性刮宫术和子宫切除术的患者。患者年龄31～68岁，术前未经化疗和放疗。增殖症和癌变子宫内膜按1988年国际妇科病理协会诊断标准分级。
　　2.实验方法：（1）免疫组织化学(免疫组化)法：标本经4%聚合甲醛固定，石蜡包埋、4 μm连续切片，按常规程序进行免疫组化检测。Bcl-X_S/L工作液浓度为1∶50，二抗及辣根过氧化物酶标记链亲和素工作液浓度为1∶200。结果判定：采用双盲法观察结果。阳性细胞呈棕黄色，按染色强度分为：不着色为阴性（－），淡棕黄色为弱阳性（+），深棕黄色为强阳性（+++），阳性着色介于弱阳性至强阳性之间(++)。（2）Bcl-X蛋白的免疫印迹（Western blot）分析：11例子宫内膜标本（1例增殖中期，3例增殖晚期，2例分泌早期，3例分泌晚期，1例简单增生，1例中分化腺癌）。每例取约100 mg组织，在300 μl悬浮缓冲液中匀浆，以10 000 r/min离心10 min，收集上清液，取20 μl进行蛋白定量。其余上清液加入等量上述缓冲液后，于15% SDS-聚丙烯酰胺凝胶中20 mA电泳4 h，于4℃、40 V电转移至硝酸纤维素膜。封闭非特异性结合位点后，膜片于1%兔抗Bcl-X抗体室温反应3 h，于0.5%(V/V)辣根过氧化物酶二抗交联物室温反应1h后，膜片与ECL试剂反应1min，X线片曝光显影。
　　二、结果
　　1.正常和异常子宫内膜中Bcl-X的分布：在正常月经周期子宫内膜中，Bcl-X阳性表达主要位于腺上皮细胞的胞浆和核膜，增殖期阳性染色主要局限于基底层，分泌期和月经期，其阳性表达功能层强于基底层。除分泌晚期有部分间质细胞可见Bcl-X阳性染色外，其余各期间质细胞均未见Bcl-X表达，异常子宫内膜中，Bcl-X阳性表达也主要位于腺上皮细胞的胞浆和核膜。
　　2.正常月经周期子宫内膜中Bcl-X表达：增殖早中期，8例标本的腺上皮细胞中未见Bcl-X表达，仅4例标本呈弱阳性表达。增殖晚期、分泌期和月经期标本中都可见Bcl-X阳性着色，但分泌期27例中，22例呈阳性及强阳性染色，月经期标本8例中，3例阳性染色，5例强阳性染色。见表1。

表1　各月经周期患者子宫内膜Bcl-X表达(例数)